в каком аппарате проводят обеззараживание инфицированного материала
Обеззараживание исследуемого материала, инфицированного бактериями I-IV групп патогенности при работе методом ПЦР
АННОТАЦИЯ
В настоящих указаниях предложены способы обеззараживания материала зараженного или подозрительного на зараженность бактериями I-IV групп патогенности при проведении генодиагностических исследований методом ПЦР.
Указания предназначены для специалистов санитарно-гигиенических, лечебно-профилактических учреждений, генодиагностических центров и лабораторий, применяющих метод ПЦР для обнаружения ДНК возбудителей инфекционных заболеваний.
РАЗРАБОТАНО: Российским научно-исследовательским противочумным институтом «Микроб» г.Саратов.
СОСТАВИТЕЛИ: Куличенко А.Н., Касьян И.А., Гаранина С.Б., Майоров Н.В.,Тучков И.В.,Еремин С.А., Дроздов И.Г., Кутырев В.В.
ВВЕДЕНИЕ
Внедрение в практику лабораторной диагностики инфекционных болезней полимеразной цепной реакции (ПЦР) должно быть обеспечено соответствующими методами подготовки проб, предусматривающими, обеззараживание исследуемого материала.
Используемые обычно в практике табельные средства стерилизации (растворы формалина, хлорамина, перекиси водорода и др.) не могут быть применены при ПЦР-анализе вследствие повреждающего действия на ДНК или ингибирования ПЦР.
В настоящих методических указаниях для работы с не образующими споры бактериями I-II групп патогенности предлагается обработка обьектов мертиолятом натрия с последующей обработкой лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом. При работе с возбудителем холеры может быть использован метод прогревания при 100°С в течение 30 минут.
Для инактивации не образующих споры микроорганизмов III-IV групп патогенности может быть использован метод термической обработки при 100°С в течение 30 минут или лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом.
Разработанные способы инактивации приводят к полному обеззараживанию материала, не повреждают ДНК и не ингибируют ПЦР.
ОПИСАНИЕ МЕТОДА
Рекомендуемые средства стерилизации материала при ПЦР-анализе имеют следующие механизмы антимикробного действия. Мертиолят натрия необратимо связывается с SH-, NH2- и COOH-группами белковых молекул с дальнейшим ингибированием дыхательной цепи микроорганизма.
Метод обеззараживания содержащих споры микроорганизмов основан на прорастании споры в вегетативные клетки при культивировании в благоприятных для герминации условиях. Далее под воздействием температуры (для сибиреязвенного микроба еще и пенициллина) происходит разрушение клеточной мембраны и выход ДНК.
Материально-техническое обеспечение*
* указанные средства измерения и оборудование может быть заменено на аналогичную по характеристикам продукцию других фирм.
СПОСОБЫ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ МАТЕРИАЛА, ИССЛЕДУЕМОГО МЕТОДОМ ПЦР
Вся работа с исследуемым материалом, подозрительным на зараженность микроорганизмами I-II групп патогенности проводится в соответствии с СП 1.2.011.-94 “Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности.” М.1994 г.
Отобранные для исследования пробы могут быть инактивированы следующими способами:
1. Материал (кровь, биологические жидкости, экстракты органов, смывы с поверхностей, фильтраты почвы), подозрительный на зараженность не содержащими споры микроорганизмами I-II групп патогенности
1.2. Обработка лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом и прогреванием при температуре 65°С: к 100 мкл обработанных мертиолятом натрия образцов (п.1.1.), разлитым в микроцентрифужные пробирки типа Эппендорф добавляют 300 мкл лизирующего буфера и инкубируют 15 минут при температуре 65°С. После выполнения данного этапа материал считается обеззараженным. Далее для выделения ДНК используют метод нуклеосорбции на силикагеле, начиная с этапа добавления сорбента. ПЦР выполняют по общепринятой методике в соответствии с указаниями к ПЦР наборам изготовителя.
1.3. Приготовление лизирующего буфера с гуанидинтиоцианатом
2. Материал, подозрительный на зараженность не содержащими споры микроорганизмами III-IV групп патогенности
2.1. Прогревание при 100°С в течение 30 минут.
2.2. Обработка лизирующим буфером с гуанидинтиоциа натом и прогреванием при 65°С в течение 15 минут, как описано в п. 1.2.
Исследуемые образцы в количестве 100 мкл помещают в микроцентрифужные пробирки типа Эппендорф, смешивают с 300 мкл лизирующего буфера с гуанидинтиоцианатом и прогревают при 65°С в течение 15 минут.
После лизиса гуанидинтиоцианатом для выделения ДНК используют метод нуклеосорбции на силикагеле, начиная с этапа добавления сорбента.
ПЦР выполняют по общепринятой методике в соответствии с указаниями к ПЦР наборам изготовителя.
3. Материал, подозрительный на зараженность содержащими споры микроорганизмами II-IV группы патогенности
3.1. Герминация спор с обработкой пенициллином и прогреванием при 100°С в течение 10 минут.
Исследуемый материал в количестве 0,1 мл засевают в пробирки с 0,9 мл бульона Хоттингера рН 7,6 и инкубируют с аэрацией при температуре 37°С в течение 2,5 часов. Добавляют пенициллин (1000ед/мл) и инкубируют при 37°С – 15 минут. Затем прогревают на водяной бане при температуре 100°С в течение 10 минут.
3.2. Обработка лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом и прогреванием при температуре 65°С : к 100 мкл обработанных как описано в п. 2.1. образцов, разлитым в микроцентрифужные пробирки типа Эппендорф добавляют 300 мкл лизирующего буфера и инкубируют 15 минут при температуре 65°С. После выполнения данного этапа материал считается обеззараженным. Далее для выделения ДНК используют метод нуклеосорбции на силикагеле, начиная с этапа добавления сорбента. ПЦР выполняют по общепринятой методике в соответствии с указаниями к ПЦР наборам изготовителя.
После инактивации проб любым из вышеописанных способов дальнейшие исследования проводятся как с обеззараженным материалом.
Дезинфекция медицинских изделий
Дезинфекции подлежат все изделия после применения их у пациента. Дезинфекция, предстерилизационная очистка, стерилизация изделий медицинского назначения и контроль направлена на профилактику внутрибольничных инфекций у пациентов и персонала лечебно-профилактических учреждений.
Основные этапы обработки инструментов медицинского назначения:
I этап – дезинфекция. Дезинфекцию изделий осуществляют физическим и химическим методами. Выбор метода дезинфекции зависит от особенностей изделия и его назначения. Физический метод дезинфекции: кипячение водяной насыщенный пар под давлением сухой, горячий воздух надежен, экологически чист и безопасен для персонала, поэтому в тех случаях, когда позволяют условия (оборудование, номенклатура изделий и т. д.), при проведении дезинфекции изделий предпочтение следует отдать этому методу. Основные правила дезинфекции физическим методом:
Химический метод дезинфекции. Основные правила этапа дезинфекции медицинского инструментария с использованием дезинфектантов:
Для дезинфекции инструментов однократного применения рекомендуется использовать хлорсодержащие средства.
При выполнении манипуляций на дому участковая служба, скорая помощь и медицинский работник должны иметь емкость с дезраствором для ополаскивания на месте. Затем шприцы складывают в плотно закрывающийся контейнер.
Уничтожение острых предметов:
Как надевать колпачок на уже использованную иглу? Всегда надевайте колпачок на иглу одной рукой, делая это следующим образом:
1. введите кончик иглы в колпачок;
2. наклоните шприц так, чтобы колпачок сел на иглу;
3. другой рукой плотно наденьте колпачок на иглу.
Действуя подобным образом, вы предохраните себя и других от укола иглой. Аккуратно обращайтесь с острым инструментарием – перчатки не предохраняют от повреждения кожи, но они частично очистят иглу от крови, уменьшая количество инокулянта.
Стандартная дезинфекция изделий медицинского назначения многократного применения: предстерилизационная очистка предусматривает окончательное удаление остатков белковых, жировых, механических загрязнений и остаточных количеств лекарственных препаратов. Предстерилизационной очистке должны подвергаться все изделия, подлежащие стерилизации. Для этого этапа обработки изделий также используют только разрешенные моющие средства.
Разобранные изделия подвергают предстерилизационной очистке в разобранном виде с полным погружением и заполнением каналов. Мойку каждого изделия по окончании экспозиции проводят при помощи ерша, ватно-марлевого тампона и других приспособлений, необходимых при ручной очистке. Каналы изделий промывают с помощью шприца. Ершевание резиновых изделий не допускается. Предстерилизационную очистку ручным способом осуществляют в емкостях из пластмасс, стекла или покрытых эмалью (без повреждений). Машинная мойка изделий предпочтительнее ручной вследствие ограничения контакта персонала с инфицированным материалом и возможности обеспечения более качественной очистки. В настоящее время существует ряд средств, позволяющих объединить в один этап обработки дезинфекцию и предстерилизационную очистку. Этапы дезинфекции такие же, как и для одноразовых шприцев. Рекомендуется использовать альдегидсодержащие средства, окислители, ЧАС.
Этапы предстерилизационной очистки:
«Абактерил» — профессиональные дезинфицирующие и моющие средства. В линейке представлены: концентрат, кожный антисептик, влажные салфетки, дисперсная система, хлорные таблетки и гранулы, дезинфицирующее мыло, детское мыло, гель-антисептик.
Дезинфекция рабочих поверхностей в медорганизации
Как обрабатывать рабочие поверхности в медорганизации
Медицинское оборудование, мебель, выключатели, ручки дверей, подоконники – благоприятная среда для размножения и распространения бактерий, вирусов, грибов.
Какой способ обработки выбрать
Окружающие объекты, с которыми пациенты и персонал редко контактируют, моют по мере загрязнения.
Стены и потолки не относятся к значимым источникам инфекции, поэтому их периодически обрабатывают моющими средствами. Исключение составляют:
Такие поверхности необходимо дезинфицировать.
Также необходимо дезинфицировать рабочие поверхности оборудования и мебели.
Когда должна проводиться дезинфекция
Дезинфекцию рабочих поверхностей помещений, оборудования и мебели проводят:
Немедленную дезинфекцию проводят для предметов обстановки, аппаратов, приборов, установленных в зоне обследования, лечения, парентеральных и инвазивных вмешательств или взятия патологического материала.
Кушетки, перевязочные столы, подлокотники кресел и другие предметы дезинфицируют после каждого пациента в манипуляционных и других помещениях, где возможно загрязнение объектов кровью или другими биологическими жидкостями.
Также дезинфицируют все объекты и поверхности при выписке пациента из палаты.
СОВЕТ
В условиях амбулаторно-поликлинического приема, в лечебно-диагностических помещениях можно не проводить дезинфекцию поверхностей (например, кушеток) после каждого пациента, если их накрывают индивидуальными простынями, пеленками.
Режимы проведения дезинфекции
При ежедневной текущей уборке обеззараживание всех видов поверхностей внутрибольничной среды проводят по режиму, обеспечивающему гибель бактериальной микрофлоры.
При генеральной уборке режимы дезинфекции определяют с учетом профиля стационара и микробной контаминации объектов.
Профилактическая дезинфекция по эпидемиологическим показаниям
Профилактическая дезинфекция по эпидемиологическим показаниям проводится с учетом особенностей конкретной внутрибольничной инфекции:
До установления диагноза используют средства с моющими свойствами, обладающие широким спектром антимикробной активности: бактерицидной, вирулицидной, фунгицидной,при подозрении на туберкулез – туберкулоцидной.
При известном диагнозе поверхности обрабатывают в соответствии с видовой принадлежностью возбудителя.
При выборе режимов применения дезинфицирующих средств следует выполнять правила:
Режим дезинфекции в кабинетах стоматологии
Различие требований к обработке поверхностей кабинетов терапевтической стоматологии определяется разграничением рабочего пространства помещения на зону лечения (строгого режима) и зону общебольничного режима.
Режим дезинфекции выбирают по наиболее устойчивым микроорганизмам – между вирусами или грибами рода Кандида. Желательно, чтобы средство не имело резкого запаха и не вызывало коррозии оборудования.
В соответствии с пунктом 8.2.3 главы V CанПиН 2.1.3.2630-10 текущую уборку проводят ежедневно, не реже 2-х раз в день, генеральную – один раз в месяц, с использованием дезинфицирующих средств по режимам, эффективным в отношении вегетативных форм бактерий.
ВНИМАНИЕ
Разрешено проводить дезинфекцию поверхностей, предметов, находящихся в зоне лечения, в присутствии пациента при условии использования дезинфицирующих средств, не обладающих раздражающим и сенсибилизирующим действием, разрешенных к применению в установленном порядке и с учетом методических рекомендаций производителя дезсредств.
Кабинеты оборудуют бактерицидными облучателями или другими устройствами обеззараживания воздуха, разрешенными для этой цели в установленном порядке. При использовании облучателей открытого типа выключатели должны быть выведены за пределы рабочих помещений.
Для проведения хирургических вмешательств выделяется кабинет хирургической стоматологии. Генеральную уборку в нем проводят один раз в неделю по режиму уборки асептических помещений.
Работу кабинета хирургической стоматологии организуют с учетом разделения потоков «чистых» (плановых) и «гнойных» вмешательств. Плановые вмешательства проводят в специально выделенные дни (по графику) с предварительным проведением генеральной уборки.
ВНИМАНИЕ
Проверяющие органы могут принять меры административного воздействия по статье 6.3 КоАП РФ за нарушение требований пункта 3.6.3 СП 3.5.1378-03, если нарушены указанные в инструкции области и способ применения дезсредств.
—
(3.6.3. Выбор дезинфицирующего средства, а также способа его применения определяются особенностями обеззараживаемого объекта, биологическими свойствами микроорганизма, что в совокупности должно обеспечить достижение дезинфекции.
Постановление Главного государственного санитарного врача России от 09.06.2003 № СП 3.5.1378-03, Санитарно-эпидемиологические правила Главного государственного санитарного врача России от 09.06.2003 № 131
О введении в действие санитарно-эпидемиологических правил СП 3.5.1378-03)
Какие средства применяем для дезинфекции
Средства для очистки и обеззараживания объектов выбирают с учетом:
ПРИМЕР
При внутригоспитальных вспышках сальмонеллеза обрабатывайте поверхности средствами, которые чувствительны к конкретному виду Salmonell. Для возбудителя внутрибольничного сальмонеллеза S.typhimurium характерна нечувствительность к рабочим растворам хлорсодержащих дезинфектантов.
Для обработки поверхностей отдают предпочтение средствам широкого спектра действия, включающим катионные поверхностно-активные вещества. Ограниченно применяют кислородактивные и хлорактивные вещества и не применяют вовсе альдегиды и фенолы.
Использование многокомпонентных средств позволяет сочетать в одном этапе дезинфекцию и мойку, а в отдельных случаях – не проводить смывание водой. Речь идет о средствах, которые содержат одно или несколько активных веществ, а также функциональные добавки (антикоррозионные, дезодорирующие, моющие).
В каких случаях метод химической дезинфекции можно заменить на биологический
Метод биологической дезинфекции бактериофагами применяют в целях:
Бактериофаги могут широко применяться в присутствии людей, в том числе недоношенных детей и беременных.
Биологический метод дезинфекции целесообразно использовать в эпидемиологически значимых специализированных отделениях (реанимации и интенсивной терапии, ожоговые, отделения недоношенных детей), применение химических дезинфицирующих средств в которых ограничено:
Показаниями к проведению дезинфекции биологическим методом с использованием бактериофагов являются:
К признакам формирования госпитального штамма (клона) относятся:
При регистрации или высоком риске появления больных госпитальным сальмонеллезом и другими бактериальными острыми кишечными инфекциями обработка соответствующим возбудителю бактериофагом проводится в палатах для пациентов, туалетных и санитарных комнатах.
Наиболее эффективное взаимодействие бактериофагов с бактериальными клетками происходит на пластмассовых, стеклянных, металлических поверхностях. Тканевые и бумажные поверхности могут являться резервуаром для потенциальных возбудителей и снижать эффективность фагирования.
Бактериофаги наносятся на возможные места скопления возбудителей: рабочие и манипуляционные столы, поверхности шкафов с лекарственными препаратами, стойки для инфузионных систем, аппаратуру, стены, прикроватные тумбочки, столы и стулья в палатах, раковины, поручни кроватей, ручки дверей и т. д.
С целью элиминации возбудителя из наркозно-дыхательной аппаратуры бактериофаг вносят в увлажнитель.
Бактериофаги устойчивы во внешней среде, совместимы со многими химическими дезинфицирующими средствами.
Качество дезинфекции биологическим методом с использованием бактериофагов проверяют путем отбора смывов с обработанных поверхностей через 6–8 часов после проведения дезинфекции.
Дезинфекцию биологическим методом с использованием бактериофагов проводит медицинская организация собственными силами.
Схемы применения бактериофагов при профилактической и заключительной дезинфекции описаны в МР 3.5.1.0101-15. 3.5.1 «Биологический метод дезинфекции с использованием бактериофагов».
Материально-техническое обеспечение дезинфекционных мероприятий
В медорганизациях должен быть не менее чем месячный запас разнообразных дезинфицирующих средств различного химического состава и назначения в соответствии с расчетной потребностью. В отделениях и на рабочих местах должны быть специальные емкости с крышками и соответствующей маркировкой. Маркировка обязательно должна включать надпись или этикетку с указанием названия дезинфицирующего средства, его концентрации, назначения, даты приготовления рабочего раствора, в случае его многократного использования — предельного срока годности.
ВНИМАНИЕ
Запрещено использовать емкости не по назначению (например, одноразовые емкости – и для дезинфекции медицинских отходов, и для обработки поверхностей).
См. пункт 1.6 главы I и пункт 1.8 главы II CанПиН 2.1.3.2630-10.
Для обработки различных объектов используют отдельные емкости с рабочими растворами дезинфекционных средств разной целевой направленности.
Наличие отдельных емкостей снижает риски перекрестной контаминации разных категорий объектов.
Для обработки поверхностей методом протирания можно применять:
Какие технологии применяют для дезинфекции
Обработку поверхностей проводят влажным способом – протиранием, орошением с помощью распылительной аппаратуры или распылением средств в аэрозольной упаковке. Так предотвращают попадание микроорганизмов в воздух с обрабатываемых поверхностей.
Метод распыления применяют для дезинфекции небольших по площади или труднодоступных поверхностей в отсутствие пациентов.
Метод орошения поверхностей с помощью специальных распылителей (генераторов аэрозолей) используют для проведения заключительной дезинфекции или при генеральной уборке.
Заключительную дезинфекцию проводит специально обученный персонал учреждения либо организация, осуществляющая дезинфекционную деятельность. В случае привлечения сторонних организаций дезинфекционные мероприятия проводятся в присутствии представителя администрации объекта (заказчика).
Присутствие сотрудников, не имеющих отношения к обработке, не допускается. Они должны быть заранее извещены о проведении дезинфекции.
Персонал, выполняющий обработку, должен использовать средства индивидуальной защиты (респиратор, перчатки, фартук), выделенный уборочный инвентарь с соответствующей маркировкой, чистые тканевые салфетки.
Обработку поверхностей осуществляют преимущественно орошением. Норма расхода дезинфицирующих средств составляет в среднем от 150 до 300 мл на 1 кв. м площади.
При проведении заключительной дезинфекции следует применять дезинфицирующие средства с широким спектром антимикробного действия (вирулицидное, бактерицидное, фунгицидное – с активностью в отношении грибов рода Кандида).
По истечении времени обеззараживания персонал меняет спецодежду, после чего обрабатывает поверхности чистыми тканевыми салфетками, смоченными водопроводной (питьевой) водой.
Обеззараживание воздуха в помещении проводят после окончания уборки по режиму, указанному в инструкции по применению конкретного оборудования.
При этом необходимо проследить, чтобы:
См. пункт 1.8 главы II и пункт 15.10 главы I СанПиН 2.1.3.2630-10.
При методе протирания поверхности обрабатывают заранее подготовленными текстильными салфетками в одну стадию, без последующего удаления нанесенных на поверхности растворов. При этом контролируют экспозиционную выдержку дезсредства.
Небольшие по площади поверхности обрабатывают готовыми одноразовыми спиртосодержащими салфетками с коротким временем обеззараживания. В этом случае обработку можно проводить в присутствии пациентов.
При дезинфекции поверхностейнеобхожимо соблюдать следующие правила
При обработке поверхностей необходимо соблюдать следующие правила:
Переходить последовательно от чистых к грязным участкам, вертикальные поверхности обрабатывать сверху вниз, особое внимание уделять поверхностям, имеющим непосредственный контакт с пациентами.
Менять моющую сторону салфетки по мере загрязнения, а салфетку – при смене объекта обработки.
Обрабатывать большие по площади поверхности несколькими салфетками.
Обрабатывать поверхности, загрязненные кровью и биологическими выделениями, в два этапа двумя чистыми салфетками:
Сбрасывать использованные салфетки в контейнер для сбора отходов класса Б либо в емкость для дальнейшей дезинфекции и стирки.
По окончании обработки протереть сухой салфеткой или ветошью, чтобы остатки влаги на поверхностях не создавали условия для размножения и распространения патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.
Использовать протирочную ветошь из текстильных материалов только после дезинфекции, стирки и просушивания.
Контроль качества дезинфекции
Контроль качества проведенных дезинфекционных мероприятий
Объективным критерием оценки качества дезинфекции являются отрицательные результаты посевов проб со всех объектов внутрибольничной среды. Лабораторные исследования проводят в рамках производственного контроля не реже одного раза в полгода.
Определить качество чистоты поверхностей, отследить выполнение дезинфекционных мероприятий и своевременно принять меры для устранения выявленных нарушений позволяет оперативный контроль.
Качество чистоты поверхностей проверяют:
Метод АТФ-люминометрии позволяет:
Контроль концентрации действующего вещества в рабочих растворах позволяет оценить правильность применения дезсредств.
Периодичность контроля устанавливает и утверждает руководитель медицинской организации при планировании в зависимости от ситуации:
СанПиН 2.1.3.2630-10 п. 3.4. Критериями оценки качества проведения дезинфекционных и стерилизационных мероприятий в МО являются:
отрицательные результаты посевов проб со всех объектов внутрибольничной среды (в том числе контроль стерильности);
показатели обсемененности воздуха, не превышающие установленные нормативы;
отсутствие в помещениях МО грызунов, подтвержденное с применением субъективной оценки и объективных методов обнаружения;
отсутствие в помещениях ДПО членистоногих, подтвержденное с применением субъективной оценки и объективных методов обнаружения.
Постановление Главного государственного санитарного врача России от 18.05.2010 № СанПиН 2.1.3.2630-10, Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы Главного государственного санитарного врача России от 18.05.2010 № 58
Об утверждении СанПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность»